Η καζεΐνη ως πρωτεϊνη του γάλακτος με την μέθοδο υγρής χρωματογραφίας και φασματομετρίας μάζας.

Προσδιορισμός της καζεινης, ως πρωτεϊνη του γάλακτος με την μέθοδο της υγρής χρωματογραφίας σε συνδυασμό με την φάσματομετρια μάζας.

Αφορά τη μελέτη των μεθόδων της ποσοτικοποίησης και του προσδιορισμού του κύριου συστατικού του γάλακτος το ποίο είναι οι πρωτεΐνες και συγκεκριμένα η καζεΐνη, οι οποία αντιπροσωπεύει το 80% των συνολικών πρωτεϊνών στο γάλα και οι διάφοροι φαινότυποι της με την μορφή της υγρής χρωματογραφίας σε συνδυασμό με την φασματομετρία μάζας.

ΠΗΓΗ: https://images.app.goo.gl/fQiTaEbS7mtEMizs7

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Νωπό γάλα νοείται το γάλα το οποίο εκκρίνεται από τους μαστικούς αδένες μιας ή περισσοτέρων αγελάδων, προβατίνων, αιγών ή βουβαλιών, το οποίο δεν έχει θερμανθεί πέραν των 40° C, ούτε έχει υποβληθεί σε επεξεργασία με ισοδύναμο αποτέλεσμα.

Στην τεχνολογία τροφίμων ο επίσημος ορισμός του γάλακτος ως προϊόν σύμφωνα με τον Ελληνικό Κώδικα Τροφίμων και Ποτών, θεωρείται ο εξής: «Γάλα είναι το απαλλαγμένο από πρωτόγαλα προϊόν του ολοσχερούς, χωρίς διακοπή αρμέγματος υγιούς γαλακτοφόρου ζώου, το οποίο ζει και τρέφεται υπό υγιεινούς όρους και που δεν βρίσκεται σε κατάστημα υπερκόπωσης». Ουσιαστικά με τον όρο «γάλα» νοείται απλά το γάλα το οποίο προέρχεται από κάποιο ζώο, είναι νωπό, δηλαδή δεν έχει υποστεί κάποια θερμική επεξεργασία, πλήρες, δεν έχει υποστεί αφυδάτωση ή

συμπύκνωση και τέλος δεν περιέχει άλλες ξένες ύλες. Τα κυριότερα συστατικά του γάλακτος είναι το νερό, το λίπος, οι πρωτεΐνες, η λακτόζη, και τα άλατα.

ΠΡΩΤΕΪΝΗ ΚΑΙ ΔΙΑΤΡΟΦΙΚΗ ΑΞΙΑ

Αυτές οι πρωτεΐνες είναι υψηλής αξίας και μπορούν να ωφελήσουν την ανθρώπινη υγεία ή να έχουν άλλες συγκεκριμένες λειτουργίες σε εφαρμογές τροφίμων. Για παράδειγμα η α-γαλακτολευκωματίνη (α-LA) ως πρωτεΐνη προστίθεται στις βρεφικές φόρμουλες προκείμενου να εξισορροπηθεί η σύνθεση με το ανθρώπινο γάλα. Επίσης, το α-LA βοηθά στην απορρόφηση ορυκτών, καθώς και στην αντιμικροβιακή και αντικαρκινική δράση. Επιπλέον, η β-καζεΐνη (β-CN), η οποία αντιπροσωπεύει το ένα τρίτο της πρωτεΐνης στο βόειο γάλα, εμπλέκεται στη μεταφορά και απορρόφηση σημαντικών θρεπτικών ουσιών και επίσης είναι μια μεγάλη πηγή βιοδραστικών πεπτιδίων, που δείχνουν φυσιολογικά ευεργετικά αποτελέσματα όπως, αναστολή θρομβίνης, αντιοξειδωτική ικανότητα και μείωση της αρτηριακής πίεσης μέσω της αναστολής της ενζύμου μετατροπής της αγγειοτενσίνης.

ΠΗΓΕΣ:1. Άρθρο 80/ Είδη γάλακτος

2. Πτυχιακή εργασία Κοντογιάννη Άρτεμης

3. Article 1: (Nguyen et al., 2020)

ΜΕΘΟΔΟΣ: ΥΓΡΗ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΥΨΗΛΗΣ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΦΑΣΜΑΤΟΜΕΤΡΙΑ ΜΑΖΑΣ ΥΨΗΛΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ. (προσδιορισμός φαινοτύπων)

ΔΕΙΓΜΑΤΟΛΗΨΙΑ

⮚ Αρχικά συλλέχτηκαν 85 μεμονωμένα δείγματα γάλακτος και αμέσως μετά την συλλογή τα δείγματα γάλακτος τοποθετήθηκαν σε ένα παγωμένο κιβώτιο και μεταφέρθηκαν εντός 30 λεπτών στο εργαστήριο.

⮚ Tα δείγματα αναμίχθηκαν καλά και τοποθετήθηκαν σε 2 αποστειρωμένα πλαστικά βάζα και στη συνέχεια αποθηκεύτηκαν στους −80 ° C μέχρι τη λυοφιλοποίηση. (Διαδικασία αφυδάτωσης η οποία μετατρέπει ένα παρασκεύασμα από υγρή μορφή σε στερεά και ύστερα γίνεται εξάχνωση).

⮚ Μετά από ξήρανση σε ειδικό μηχάνημα κατάψυξης, η σκόνη γάλακτος συσκευάστηκε σε κενό και αποθηκεύτηκε στους −80 ° C έως ότου πραγματοποιήθηκε η ανάλυση των παραλλαγών β-CN.

⮚ Όσον αναφορά την μέθοδο της δειγματοληψίας , να σημειωθεί πως η δειγματοληψία περιορίστηκε σε συνήθεις διαδικασίες στο αγρόκτημα που δεν προκάλεσαν ταλαιπωρία ή άγχος στα ζώα. Οι αγελάδες ήταν υγιείς και δεν είχαν κλινικά συμπτώματα μαστίτιδας και επίσης καταγράφηκε το στάδιο γαλουχίας και ο κύκλος όλων των αγελάδων. Τέλος, όλες οι διαδικασίες συλλογής γάλακτος ακολούθησαν τα πρωτόκολλα που εγκρίθηκαν από τις Εθνικές Οδηγίες για τον Πειραματισμό των Ζώων και τη Δανική Επιτροπή Πειραματικής Ηθικής των Ζώων.

ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ

1. Αρχικά, κατεψυγμένα δείγματα αποξηραμένου γάλακτος ανασυστάθηκαν με εξαιρετικά καθαρό νερό, δημιουργώντας διάλυμα 10% (w/v).

2. Μετά από πλήρη ανάμιξη για 30 λεπτά, το δείγμα γάλακτος περιστράφηκε στα 2000 ×  g για 5 λεπτά για να φέρει το στρώμα κρέμας στην κορυφή του σωλήνα μικροφυγοκέντρησης. Ένα κλάσμα του αποκορυφωμένου κλάσματος γάλακτος μεταφέρθηκε σε νέο σωλήνα μικροφυγοκέντρησης για περαιτέρω ανάλυση.

3. Για καταβύθιση καζεΐνης, 50 μL αποβουτυρωμένου δείγματος γάλακτος προστέθηκαν σε 1 mL οξικού αμμωνίου(CH3COONH4) 2Μ, pH=4,2 και φυγοκεντρήθηκαν στα 2500 ×  g για 5 λεπτά.

4. Ύστερα το σφαιρίδιο καζεΐνης πλύθηκε πρώτα με εξαιρετικά καθαρό νερό και μετά με ακετόνη για την απομάκρυνση των υπολειμματικών πρωτεϊνών ορού γάλακτος και λιπαρών οξέων.

5. Το σφαιρίδιο καζεΐνης ξηράνθηκε σε θερμαντικό μπλοκ για 10 λεπτά στους 40 ° C και ανασυστάθηκε με την προσθήκη 200 μL ρυθμιστικού διαλύματος ουρίας 9 Μ.

6. Μετά την ανάμιξη, η διαλυτοποιημένη καζεΐνη συμπληρώθηκε έως 1 mL με 250 mM Tris, ρυθμιστικό διάλυμα ρΗ=8.2, στροβιλίστηκε και μετά περιστράφηκε στα 12.000 ×  g για 5 λεπτά. Δείγμα δείγματος μεταφέρθηκε σε φιαλίδιο δείγματος καφέ γυαλιού για ανάλυση UHPLC-HRMS.

ΠΗΓΕΣ ΦΩΤΟΓΡΑΦΙΩΝ: 1. https://images.app.goo.gl/q9ivbo5YKTpXQi8r7 2. https://images.app.goo.gl/uUcjoTQmGqWExmC69 3. https://images.app.goo.gl/vJQ3amuXHwUwMotd8 4. https://images.app.goo.gl/F7mgAV11H474EvQk8 5. https://images.app.goo.gl/8hA9kS1UknraDB7w5 6. https://images.app.goo.gl/NQqJdVYXs6tRCnrk7

ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΠΑΡΑΛΛΑΓΩΝ β-CN ΜΕ UHPLC-HRMS

⮚ Χρησιμοποιήθηκε στήλη Agilent Poroshell 120 (100 × 3,0 mm, 2,7 μm) EC 18 για τον χρωματογραφικό διαχωρισμό πρωτεϊνικών στόχων. Ο διαχωρισμός πραγματοποιήθηκε στους 48 ° C χρησιμοποιώντας ένα θερμοστατικό διαμέρισμα στήλης.

⮚ Κινητή φάση Α αποτελούμενη από εξαιρετικά καθαρό νερό με 0,1% (v / v) τριφθοροξικό οξύ (C2HF3O2).

⮚ Κινητή φάση Β αποτελείται από ακετονιτρίλιο (CH3CN). Χρησιμοποιήθηκε μια βαθμίδα για χρωματογραφικό διαχωρισμό ξεκινώντας από 35% Β αυξήθηκε σε 43% Β σε 10 λεπτά με ρυθμό ροής 0,8 mL / min και όγκο ένεσης 5 μL.

⮚ Οι στοχευόμενες ενώσεις που εκλύονται από τη στήλη υγρής χρωματογραφίας (LC) εισήχθησαν στο φασματόμετρο μάζας χρησιμοποιώντας θερμαινόμενη πηγή ιονισμού ηλεκτροψεκασμού (HESI-II). Η πηγή ESI λειτουργούσε σε λειτουργία θετικού ιόντος με τριχοειδή τάση ρυθμισμένη στα 4,0 kV και η θερμοκρασία του σωλήνα μεταφοράς ιόντων ρυθμίστηκε στους 350 ° C. Πλήρεις σαρώσεις MS αποκτήθηκαν κατά τη διάρκεια του εύρος m / z 500- 2000 με ανάλυση μάζας 70 000 (σε m / z 200). Οι χρόνοι έγχυσης ιόντων ρυθμίστηκαν από τον αυτόματο έλεγχο κέρδους οργάνου (AGC, 1 × 10 6) με μέγιστο χρόνο συσσώρευσης ιόντων 200 ms.

⮚ Η αποκωδικοποίηση των ισοτοπικά διαλυμένων δεδομένων υψηλής ανάλυσης MS1 πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το πακέτο λογισμικού Protein Deconvolution v4.0.

⮚ Η αποσύνθεση των ακέραιων κορυφών πρωτεΐνης πραγματοποιήθηκε χειροκίνητα χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Xtract με χρωματογράφημα m / z που κυμαίνεται από 600 έως 2000 Da.

⮚ Ο ακριβής προσδιορισμός μοριακού βάρους μεμονωμένων κορυφών β καζεΐνης συγκρίθηκε στη συνέχεια με έναν θεωρητικό κατάλογο μονοϊσοτοπικής μάζας που ελήφθη από δεδομένα αλληλουχίας παραλλαγής β καζεΐνης με την προσθήκη πέντε υπολειμμάτων φωσφοριωμένων αμινοξέων (+399.8316 Da)

ΠΗΓΕΣ ΦΩΤΟΓΡΑΦΙΩΝ: 1. https://images.app.goo.gl/J3toFF2g9zCaqS5x8

2. https://images.app.goo.gl/6CbvU87fd7ncSvzC9

3. https://images.app.goo.gl/5KrpcavHekuWYYcd9

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΜΕΘΟΔΟΥ

Τα δείγματα αξιολογήθηκαν με UHPLC-HRMS χρησιμοποιώντας ένα φασματόμετρο μάζας Q Exactive Orbitrap. Αρχικά τα χρωματογραφήματα UHPLC-HRMS παρείχαν φάσματα μάζας ανέπαφων παραλλαγών b-CN στα μεμονωμένα δείγματα γάλακτος, από τα οποία οι παραλλαγές b-CN θα μπορούσαν να προσδιοριστούν με την ανασυγκρότηση των ισοτοπικά διαλυμένων φασμάτων (m/z) για κάθε κατάσταση φόρτισης από μεμονωμένες κορυφές πρωτεΐνης.

Q Exactive Orbitrap

ΠΗΓΗ: https://images.app.goo.gl/cLGFzDxFfyZpx4A77

Οι παραλλαγές b-CN ταυτοποιήθηκαν συγκρίνοντας την αποκωδικοποιημένη πειραματική μονοϊσοτοπική μάζα με τις θεωρητικές μονοϊσοτοπικές μάζες γνωστών παραλλαγών b-CN. Οι φαινότυποι b-CN οι οποίοι προσδιορίστηκαν στα δείγματα του γάλακτος , αποτελούνται από A1A1, A1A2, A2A2 KAI A2I. Ο συνηθέστερος φαινότυπος ο οποίος ανιχνεύτηκε με ποσοστό 0,448 ήταν το ομόζυγο γάλα Α2Α2 και ακολουθείται από ετερόζυγο γάλα Α1Α2 με ποσοστό 0,400. Τέλος μέσω της έρευνας ανακαλύφτηκε πως οι φαινότυποι και τα ποσοστά των φαινοτύπων στο γάλα εξαρτώνται από το είδος της αγελάδας (διασταυρώσεις) και επίσης πως τα αποτελέσματα της έρευνας για τον φαινότυπο b-CN έχουν μεγάλη αξία για τις γαλακτοκομικές βιομηχανίες.

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ

Αυτή η εργασία απέδειξε ότι το UHPLC-HRMS είναι μια εξαιρετική τεχνική η οποία παρέχει μοριακό βάρος μιας σειράς παραλλαγών β-CN με μεγάλη αναλυτική ακρίβεια. Τα παρόντα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο φαινότυπος β-CN A2A2 ήταν ο πιο συνηθισμένος στο γάλα. Τέλος, μέσω τις έρευνας το γάλα των διασταυρωμένων βοοειδών ΗF1,ΗF2,ΗF3 περιέχει το υψηλότερο ποσοστό των φαινοτύπων Α2Α2. ΠΗΓΗ: 1. Article 1: (Nguyen et al., 2020)

ΜΕΘΟΔΟΣ LC-MS/MS: ΠΟΣΟΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΚΑΙ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΓΕΝΕΤΙΚΩΝ ΠΑΡΑΛΛΑΓΩΝ β-ΚΑΖΕΪΝΗΣ.

Η μέθοδος υγρής χρωματογραφίας – φασματομετρία μάζας διαδοχικής μάζας LC MS/MS, μαζί με πολλαπλή παρακολούθηση της αντίδρασης (MRM) συμβάλει στον ποσοτικό προσδιορισμό των πρωτεϊνών και στην ανίχνευση γενετικών παραλλαγών.

ΥΛΙΚΑ: Ιωδοακεταμίδιο, διθειοερυθριτόλη, ρυθμιστικό όξινου ανθρακικού, τριαιθυλαμμωνίου(TEAB) 1M, ακετονιτρίλιο, μυρμηκικό οξύ(FA), b-CN και πρότυπα πεπτιδίων.

ΤΡΥΠΤΙΚΗ ΠΕΨΗ ΓΙΑ ΠΡΟΤΥΠΑ β-CN

1. 1mg πρωτεΐνης διαλύθηκε σε 1ml όξινου ανθρακικού τριαιθυλαμμωνιού και έτσι δημιουργήθηκε διάλυμα πρωτεΐνης 1mg/ml.

2. Προσθήκη 1,5 μL αναγωγικού παράγοντα (20 mg / mL DTE σε 40 mM TEAB, ρΗ 8) σε 20 μL του πρωτεϊνικού διαλύματος και ύστερα επωάστηκε για 30 λεπτά στους 60 ° C.

3. Αλκυλιώθηκαν με ιωδοακεταμίδιο οι ομάδες τις πρωτεϊνικής θειόλης.(1.5 μL 50 mg / mL ιωδοακεταμιδιού σε 40mΜ , pH 8) προστέθηκε στο μειωμένο διάλυμα και επωάστηκε για 30min στους 37° C)

4. Το διάλυμα υπέστη πέψη με 20μL θρυψίνης και στην συνέχεια επωάστηκε για 16h στους 37° C.

5. Τέλος, πριν την ανάλυση για να ληφθεί η τελική συγκέντρωση 1%FA οι πέψεις οξύνθηκαν με 7,5% μυρμηκικό οξύ.

ΑΝΑΛΥΣΗ LC-MS/MS ΠΛΗΡΟΥΣ ΣΑΡΩΣΗΣ

1. Αρχικά, οι όξινες πέψεις των β-CN φυγοκεντρήθηκαν στα 10.000χg για 5min στους 10° C και στην συνέχεια αραιώθηκαν 5 φορές σε 5%ACN και 0.1%FA. 2. Οι όξινες πέψεις τοποθετήθηκαν σε στήλη Aeris Peptide C18. 3. Χρησιμοποιήθηκε μια κινητή φάση νερού, βαθμού LC-MS με 0,1FA(A) και 90% AGN με 0,1% FA(B).

4. Οι αρχικές συνθήκες κινητής φάσης ήταν 2%Β, η οποία κρατήθηκε για 5 λέπτα πριν αυξηθεί σε 40% σε διάστημα 80min. Ο ρυθμός ροής ήταν 200μL/min , η στήλη διατηρήθηκε σε 40° C και ο λόγος έκχυσης ήταν 10μL.

5. Η μαζική σάρωση για λειτουργία MS ήταν από 400 έως 1800m/z και η λειτουργία MS/MS ήταν από 200 έως 1200m/z.

6. Τέλος, τα δεδομένα αναζητήθηκαν σε μια εσωτερική βάση δεδομένων, ειδικά τροποποιημένη για πρωτεΐνες γάλακτος βοοειδών.

ΠΑΡΑΚΟΛΟΥΘΗΣΗ ΠΟΛΛΑΠΛΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΕΩΝ

Οι όξινες πέψεις φυγοκεντρήθηκαν στα 10.000 χ g στους 10 ° C για 5 λεπτά και αραιώθηκαν 50 φορές σε 5% ACN και 0.1% FA. Ένα μείγμα ISTD με τη συγκέντρωση 25 fmol / μL προστέθηκε στα τυποποιημένα διαλύματα και στα αραιωμένα προϊόντα πέψης. Οι λύσεις στη συνέχεια αναλύθηκαν σε ένα σύστημα 1260 Infinity LC σε συνδυασμό με ένα 6460 Triple Quad (QQQ) MS. Τα πεπτίδια που δημιουργήθηκαν από την τρυπτική πέψη διαχωρίστηκαν σε στήλη Zorbax Eclipse Plus C18 (2,1 mm × 50 mm, 1,8 μm, Agilent) στους 45 ° C. Οι κινητές φάσεις περιείχαν (A) 0,1% FA σε νερό Milli-Q και (B) 90% ACN σε νερό Milli-Q με 0,1% FA με ρυθμό ροής 550 μL /min. Η διαβάθμιση είχε ως εξής: 0-40% Β σε 18 λεπτά και αύξηση σε 80% Β σε 5 λεπτά. Ο όγκος της ένεσης ήταν 10 μL. Το 6460 QQQ λειτούργησε σε λειτουργία MRM με βέλτιστο χρόνο παραμονής, θραυστήρα (F) και ενέργεια σύγκρουσης (CE). Ο ποσοτικός προσδιορισμός βασίστηκε στην καμπύλη βαθμονόμησης με άξονα x ως τυπική συγκέντρωση και άξονα y ως ο λόγος της περιοχής αιχμής του αναλυτή προς το ISTD. Αυτό πραγματοποιήθηκε από το λογισμικό ποσοτικής ανάλυσης MassHunter.

ΠΗΓΕΣ ΦΩΤΟΓΡΑΦΙΩΝ: 1. https://images.app.goo.gl/S2Thzwpn3gehbFnn72. https://images.app.goo.gl/Vbs3xMDVYigS1C2t73. https://images.app.goo.gl/kQpMe2BLyvBiMq8i84.

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ

Αρχικά, η μέθοδος LC-MRM-MS θεωρείται σημαντική, εφόσον μπορεί να επιλύσει στενές κορυφές παρόμοιων πρωτεϊνών, λόγω της υψηλής εκλεκτικότητάς του. Έτσι, η καθιερωμένη μέθοδος θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για ταυτόχρονη ποσοτικοποίηση διαφόρων κλασμάτων πρωτεΐνης σε δείγματα βοοειδών γάλακτος που κυμαίνονται από κύριες πρωτεΐνες όπως πρωτεΐνες καζεΐνης και ορού γάλακτος έως και δευτερεύουσες πρωτεΐνες.

ΠΗΓΕΣ: 1.Article 2 (Le, Poulsen, Kristiansen and Larsen, 2020) ΓΕΝΕΤΙΚΕΣ ΠΑΡΑΛΛΑΓΕΣ β-CN

Η προσέγγιση που χρησιμοποιήθηκε στην παρούσα μελέτη επέτρεψε την ανίχνευση και την διάκριση γενετικών παραλλαγών που ανήκουν στις μακρό-οικογένειες της β καζεΐνης που μοιάζουν με Α1 και Α2. Συγκεκριμένα, η μέθοδος LC- MS συμβάλει

πέρα από την ποσοτικοποίηση των πρωτεϊνών στην ανάπτυξη μιας αναλυτικής μεθόδου LC-HRMS για τη διάκριση των Α1 και Α2 β-καζεΐνης χρησιμοποιώντας ένα τυπικό υλικό, την εξαγωγή και επεξεργασία πρωτεϊνών σε δείγματα πραγματικού γάλακτος , την εφαρμογή της διαδικασίας προκειμένου να ελεγχθεί η ικανότητά του να διακρίνει τις κατηγορίες γάλακτος και τέταρτων ενισχύει την ανίχνευση μικρών ποσοστών εμπορικού γάλακτος που προστίθεται στο γάλα.

Συγκεκριμένα η β-καζεΐνη των βοοειδών είναι μια πολύ πολυμορφική πρωτεΐνη. Η αναπτυγμένη μέθοδος αποδείχθηκε κατάλληλη για την ανίχνευση β-καζεΐνης σε δείγματα πραγματικού γάλακτος. Αρκετές παραλλαγές β-καζεΐνης έχουν παρόμοιες φυσικοχημικές ιδιότητες , οπότε απαιτούνται μακρές χρωματογραφικές δοκιμές, για τον καλό διαχωρισμό κορυφής. Επιπλέον, η χρήση ανιχνευτών UV σε συνδυασμό με HPLC, λαμβάνονται περιορισμένες πληροφορίες σχετικά με την ταυτότητα της πρωτεΐνης.

ΠΗΓH:1.Article 4(De Poi et al., 2020)

ΑΝΟΣΟΧΡΩΜΑΤΟΛΟΓΙΑ ΠΛΕΥΡΙΚΗΣ ΡΟΗΣ

Αναπτύχθηκε μια νέα μέθοδος βασισμένη σε ανοσοχρωματογραφία πλευρικής ροής που συνδυάζει την ταυτόχρονη και ανεξάρτητη ανίχνευση και των δύο πρωτεϊνών β λακτοσφαιρίνης και καζεΐνης σε μία ταχεία δοκιμή και συγκεκριμένα ικανή να ανιχνεύσει ταυτόχρονα και ανεξάρτητα δύο διαφορετικές αλλεργιογόνες πρωτεΐνες. Μεταξύ των πρωτεϊνών του γάλακτος, οι καζείνες θεωρούνται οι πιο αλλεργιογόνες σε σύγκριση με άλλες διάφορες πρωτεΐνες.

ΠΗΓΗ:1.Article 5 (Galan-Malo et al., 2019)

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ

Εν κατακλείδι, η μέθοδος ανάλυσης με φασματόμετρο μάζας ηλεκτροστατικού πεδίου LTQ Orbitrap XL LC-MS θεωρείται μέθοδος υψηλής ανάλυσης με υψηλό δείκτη ευαισθησίας, ακρίβειας, σάρωσης. Η μέθοδος υγρής χρωματογραφίας φασματομετριάς μάζας συμβάλει αρχικά στην ποσοτικοποίηση των πρωτεϊνών, την ανίχνευση των διαφόρων φαινοτύπων και γονοτύπων την β-CN, τον προσδιορισμό των νουκλεϊκών οξέων και του μοριακού βάρους. Τέλος, όλοι οι μέθοδοι θεωρούνται

εξαιρετικές τεχνολογίες και συμφέρουσες βιομηχανικά για την ανίχνευση των πρωτεϊνών στο γάλα αλλά και στα διάφορα παράγοντα τους.

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ ΞΕΝΟΓΛΩΣΣΗ

1. Nguyen, D., Solah, V., Busetti, F., Smolenski, G. and Cooney, T., 2020 Application of ultra-high performance liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry (Orbitrap™) for the determination of beta-casein phenotypes in cow milk. Food Chemistry, 307, p.125532.

2. Le, T., Poulsen, N., Kristiansen, G. and Larsen, L., 2020. Quantitative LC MS/MS analysis of high-value milk proteins in Danish Holstein

cows. Heliyon, 6(9), p.e04620

3. XU, M., DAI, J., XIANG, M., CHENG, X., ZENG, X., WAN, C. and ZHOU, W., 2014. Study on Differences of Milk Proteins by Liquid Chromatography-Mass Spectrometer. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 42(4), pp.501-506.

4. De Poi, R., De Dominicis, E., Gritti, E., Fiorese, F., Saner, S. and Polverino de Laureto, P., 2020. Development of an LC-MS Method for the Identification of β-Casein Genetic Variants in Bovine Milk. Food Analytical Methods, 13(12), pp.2177-2187.

5. Galan-Malo, P., Pellicer, S., Pérez, M., Sánchez, L., Razquin, P. and Mata, L., 2019. Development of a novel duplex lateral flow test for simultaneous detection of casein and β-lactoglobulin in food. Food Chemistry, 293, pp.41-48.

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ ΕΛΛΗΝΙΚΗ

1.Άρθρο 80/ Είδη γάλακτος

2. Πτυχιακή Κοντογιάννη Άρτεμης

.